Introduzione: il ruolo decisivo della scelta del campo biologico nel Tier 2 forense
Nel Tier 2 forense italiano, la selezione accurata dei campi biologici raccolti costituisce il fondamento per la generazione di un profilo genetico affidabile, che può determinare l’esito di indagini criminali complesse. A differenza del Tier 1, che definisce le linee guida normative e la governance generale, il Tier 2 si concentra su procedure operative precise, con particolare attenzione alla conservazione della integrità molecolare e alla minimizzazione di contaminazioni e degradazione — fattori critici per garantire validità legale. L’errore nella scelta del campione o nella modalità di raccolta può invalidare mesi di analisi, rendendo indispensabile un approccio sistematico, standardizzato e supportato da controlli rigorosi.
1. Differenze metodologiche tra Tier 1 e Tier 2 e il ruolo cruciale della raccolta campioni biologici
Il Tier 1 stabilisce il quadro legale e organizzativo: norme nazionali, responsabilità istituzionali, e principi di governance per la catena di custodia. Tuttavia, è nel Tier 2 che la selezione del campo biologico si trasforma in un processo tecnico di precisione, dove ogni scelta influisce direttamente sulla qualità del DNA estratto e sull’affidabilità del profilo STR.
- Tier 1
- Definisce standard nazionali per raccolta, conservazione e tracciabilità campioni biologici, con enfasi su documentazione, autorizzazioni e protocolli di sicurezza.
- Tier 2
- Focus operativo: selezione mirata del tessuto (sangue, saliva, capelli, tessuti epiteliali), controllo della temperatura durante trasporto, utilizzo di contenitori certificati, e validazione pre-analitica tramite test molecolari. Il Tier 2 esige non solo conformità, ma precisione operativa per prevenire errori critici.
- Campi biologici prioritari nel Tier 2
-
- Sangue per STR (Short Tandem Repeats): campione gold standard per profiling forense, richiede conservazione a 4°C o congelamento a -20°C.
- Saliva: utile per analisi mitocondriali e profili non codificati, ma più suscettibile a contaminazione salivare orale.
- Capelli con bulbo: essenziali per analisi del DNA nucleare; la raccolta deve preservare il follicolo.
- Tessuti epiteliali (es. mucose, pelle): ottimi per DNA degradato o in quantità limitate, ma richiedono tecniche di disinfestazione locali rigorose.
2. Fondamenti tecnici: criteri avanzati per la scelta del campo biologico
La selezione del campo biologico deve basarsi su tre assi fondamentali: tipologia tissutale, stabilità molecolare e tracciabilità operativa.
- Criteri di tipologia tissutale
-
- Sangue: massima concentrazione di DNA nucleare, stabile a 4°C per 48h, ideale per STR.
- Saliva: contiene DNA epiteliale butirrato, degradabile rapidamente se esposta a calore o UV.
- Capelli: presenza del bulbo garantisce DNA nucleare; la parte centrale è DNA mitocondriale, meno polimorfico ma più abbondante in campioni vecchi.
- Tessuti epiteliali: raccolti con tamponi sterile (es. swab secco o umido), la manutenzione della sterilità è essenziale per evitare contaminazioni crociate.
- Stabilità molecolare: parametri critici
-
Campo biologico Stabilità DNA (ore) Condizione ottimale Tempo conservazione max (4°C) Sangue 72–96 h 4°C, in contenitore sigillato 72 h Saliva 24–48 h 4°C, senza esposizione a calore 24 h Capelli (bulbo) >96 h 4°C, con follicolo preservato >96 h Tessuti epiteliali 48–72 h 4°C, con conservazione a -20°C per campioni degradati 48 h - Temperatura critica
- Ogni superamento di 4°C degrada rapidamente il DNA estratto, riducendo la capacità di amplificazione STR. Il monitoraggio con data logger è obbligatorio.
Takeaway critico: “Il sangue è il campione più stabile per profiling STR, ma richiede conservazione a 4°C per massimizzare la qualità. Qualsiasi ritardo nel trasporto o esposizione a calore aumenta il rischio di frammentazione del DNA.
In Italia, laboratori come il Centro Nazionale di Medicina Forense di Roma hanno documentato casi in cui campioni di sangue conservati oltre 48h a temperatura ambiente hanno mostrato rapporti STR >80% inferiori rispetto a quelli a 4°C, compromettendo l’identificazione. — *Fonte: Analisi interna CNMF 2023*.
3. Fasi operative dettagliate per la selezione e raccolta ottimale
Il Tier 2 richiede un processo strutturato, con documentazione rigorosa e manipolazione sterile. Ogni fase è critica per preservare l’integrità molecolare.
-
Fase 1: Identificazione e autorizzazione del sito di raccolta
- Conformità al Decreto Ministero della Salute 15/2021: solo centri accreditati possono raccogliere campioni biologici per analisi forense.
- Verifica della presenza di setup certificati: aree sterili, disinfettanti approvati, e kit monouso con sigillatura a prova di perdita (es. contenitori ISO 15189).
- Documentazione
